硝基四唑氮蓝试验

硝基四唑氮蓝试验用于诊断儿童慢性肉芽肿病。NBT低值见于慢性肉芽肿、先天性丙球缺乏症、红斑狼疮以及使用免疫抑制剂等。此法还可用于区别细菌与病毒感染。如为病毒感染时，虽有发热，但NBT仍正常;只有细菌、真菌感染时，NBT阳性细胞增加。NBT试验还可用于器官移植后发热反应的鉴别诊断。如因细菌感染而发热，NBT值升高;但如因体内非特异性反应而发热，则NBT值保持正常。

（1）2.0g/L NBT生理盐水溶液：取NBT 20mg，加于10ml生理盐水中，置80℃水浴，搅拌溶解，先用滤纸过滤，再经G6除菌，分装，放4℃冰箱保存备用。试验前新鲜配制NBT应用液，取2.0g/L NBT生理盐水溶液加等量下述缓冲液，混合后即可。　　

（2）pH7.2 0.15mol/L磷酸葡萄糖生理盐水缓冲液：0.15mol/L Na2HPO4，70ml；0.15mol/L KH2PO4，30ml；葡萄糖100mg，混合溶解，过滤，分装，55.16kPa，高压灭菌20min，置冰箱保存。　　操作方法：　　

（1）取肝素（100u/ml）抗凝血0.1ml放入凹玻片中，加NBT应用液0.1ml和NBT应用液0.1ml，混匀。置湿盒中，37℃ 15min（其间振摇1次）再移室温15min。　　

（2）取1滴混合液，推成薄片，晾干。　　

（3）用甲醇固定3min，吹干，加10.0g/L沙黄水溶液染色5min（也可用50.0g/L甲基绿水溶液染色15min，或用姬姆萨-瑞氏染液染色），水洗，晾干。　　

（4）用显微镜检查，凡中性粒细胞的胞浆内含有斑点状或块状深蓝色物质沉着的为NBT阳性细胞，细胞核有不同程度的退行性变，细胞有时肿大。共计数100～200个中性粒细胞，计其NBT阳性细胞百分率

　　(1)肝素抗凝血和NBT应用液等量混合后保温。保温方式很重要，水浴中会使NBT还原减少。

　　(2)计数时，凡聚集成团或破裂的中性粒细胞和单核细胞不计在内。经常有成堆的血小板黏附在中性粒细胞上，注意区别。

　　(3)本试验特异性不强，目前主要用于慢性肉芽肿和细菌系统感染的筛选。