中性粒细胞趋化试验

手掌硬性水肿

中性粒细胞趋化试验作用为临床上某些疾病患者中性粒细胞运动功能的检测指标。中性粒细胞趋化性降低，主要提示血中缺乏补体C3，常见于反复感染、齿龈炎、中耳炎及外周血中中性粒细胞减少症等。中性粒细胞趋化功能缺陷还见于che-diak-Higashi综合征、迟钝性白细胞综合征、肌动蛋白功能不全症、膜糖蛋白缺陷症、高IgE综合征等。

(1)平皿打孔加样：将配制好的上述琼脂平皿，用2.4mm内径的打孔器打孔，孔距为2～4mm。每一平皿可同时检测6份标本。每一行三孔，测定一份标本。中孔加白细胞悬液5μl，外孔加大肠杆菌24h液体培养物的过滤液5μl，内孔加Tc199培养液5μl作为对照。　　

(2)保温：将上述平皿加样后，加入湿盒内37℃，温育2～3h。　　

(3)固定染色：每一平皿加甲醇3ml，处理30min。继加47%中性福尔马林溶液3ml，固定30min。剥除琼脂糖层，黏附固定在平皿底层的细胞用瑞氏染色，水洗干燥

　　(1)配制琼脂糖平皿也可用Eagle培养液、RP-MI-1640培养液，但必须添加血清(AB型正常人血清或小牛血清均可)，最终浓度为10%～20%。如无血清，则移行细胞数减少且分散，趋化移动减弱。

　　(2)受检中性粒细胞不能用葡聚糖沉降法收集，因其能抑制中性粒细胞移行的能力。

　　(3)加入每孔的中性粒细胞数必须准确定量，其数量多少与趋化移动密切相关。细胞数过多，趋化指数降低，细胞数过少，趋化指数虽不降低，但因移行细胞数减少且分散，常难以正确测量细胞移行的距离。

　　(4)孔距以2.4mm较为理想，孔距过大，可使趋化因子在琼脂糖中扩散过大而稀释。

　　(5)培养时间2～3h，细胞移行即达高峰。在5% CO2环境中培养，能增进中性粒细胞趋化移动的能力。