淋巴细胞毒试验

浅表淋巴结肿大

淋巴细胞毒试验可以作为体外测定肿瘤患者细胞免疫的指标;也可以通过测定机体免疫活性细胞杀伤肿瘤细胞的能力，来判断肿瘤患者的预后;还可以鉴定淋巴细胞的功能性亚群。

1靶细胞的接种：选用能贴壁生长的肿瘤细胞，用Hank液洗涤后经2.5g/L胰酶消化2～3min，倒去胰酶液(细胞仍贴在瓶壁)，用Hank液轻洗细胞3次，倒去Hank液。用含10%～20%小牛血清的RPMI 1640液将贴壁细胞冲洗下来，用100目滤网过滤除去细胞团块，制备成1×106/ml单个肿瘤细胞悬液，用滴管吸取细胞悬液滴入40孔培养板中，每孔1滴(约含100～150个细胞)，置培养板于37℃含5% CO2孵箱中20h。取出培养板甩去其中培养液，瑞氏染色后计数每10孔中平均贴壁的肿瘤细胞数，如果两组平均数相差＞1/3，表明误差太大不能使用，如果误差不大其它各培养板可进行正式试验。　　

2分离淋巴细胞：取受检者肝素抗凝血3ml，用聚蔗糖-泛影葡胺分层液分离淋巴细胞后再用Hank液洗3次，然后用RPMI 1640液配成(2～3)×105/ml细胞悬液。　　

3细胞毒试验：淋巴细胞和靶细胞按200∶1比例混合，每孔中加入(2～3)×104个淋巴细胞(0.1ml体积中)约每孔再加入含20%小牛血清的RPMI 1640液0.1ml，置培养板于37℃ 5%CO2孵箱中40h。取出培养板甩去培养液，瑞氏染色后于显微镜下计数培养板底部残留的靶细胞数。

　　(1)在测定受检者淋巴细胞攻击肿瘤细胞的能力时，实验组中加入肿瘤细胞和受检者淋巴细胞，对照组中加入肿瘤靶细胞和培养液。若检测其它样品如肿瘤抗原或免疫原、治疗药物等与细胞免疫的关系，则应增设第3组，在此试验组中先使淋巴细胞与待测样品作用，继经洗涤后再观察此“致敏淋巴细胞”对肿瘤靶细胞的杀伤作用。此时前两组成为对照组。

　　(2)靶细胞与淋巴细胞的活率要处于最佳状态，一般要>90%。

　　(3)加入培养液中的小牛血清须先作毒性试验。

　　(4)接种靶细胞和淋巴细胞的计数要准确。

　　(5)实验组和对照组应安排在同一块板上以减少误差。

　　(6)培养液的pH以6.8～7.2最为适宜。