T4淋巴细胞亚群

T4淋巴细胞亚群试验是观察机体细胞免疫水平的重要方法。对恶性肿瘤、自身免疫性疾病、免疫缺乏症、血液系统疾病的诊断、治疗及预后判断有重要价值。降低：低丙种球蛋白血症、细菌感染、某些病毒感染。升高：急性移植物抗宿主病(GVH)、肉瘤、硬皮病、皮肤黏膜淋巴结综合征。

1）直接免疫荧光法　　①取肝素抗凝外周血，用淋巴细胞分层液获得单个核细胞，Hank液配成（1～2）×106细胞/ml。　　②取1ml细胞悬液加入5ml塑料管中，离心2000r/min，2min，弃上清。　　③加FITC-CD4 20μl，对照管加mIgG-FITC，4℃反应30min。　　④Hank液洗2次，2000r/min，2min。　　⑤流式细胞计分析。　　

（2）间接免疫荧光法　　①分离PBMC，调至（1～2）×106细胞/ml。　　②取1ml细胞悬液于5ml塑料管中，离心2000r/min，2min，弃上清。　　③加抗CD4单克隆抗体100μl，对照管加抗体稀释液或正常小鼠IgG，4℃反应30min。　　④Hank液洗2次，离心2000r/min，2min，弃上清。　　⑤加50μl FITC-IgG，4℃反应30min。　　⑥Hank液洗2次，2000r/min，2min。　　⑦滴片，荧光显微镜观察或流式细胞计分析

　　同B细胞检测。另外，由于间接免疫荧光技术所用的羊或兔抗鼠荧光抗体与部分白细胞表面发生非特异结合，以及Fc受体的非特异细胞反应和多克隆荧光抗体的结合放大效应，从而造成非特异阳性荧光细胞增多。而对FITC直标单克隆抗体来说，抗体成分、性质和结构上完全均一，只要不使蛋白质-FITC复合物上带上过多的电荷，就不会产生非特异吸附。目前国外基本上是用直接免疫荧光法，流式细胞计来分析T细胞亚群的，由于该仪器价格昂贵，国内尚未普及应用。因而对一般临床实验室来说，用免疫荧光显微镜也能开展这项工作。