血小板凝集功能试验

肌衄血小板减少血瘀阻络血液改变高粘滞综合征

生理情况下，血小板与血小板之间具有黏附成血小板粒或块的功能称血小板聚集功能，测定血小板聚集功能的方法称血小板聚集试验(PAgT)，常用比浊法。(1) 血小板聚集率减低：血小板无力症、巨大血小板综合征、贮藏池病、May-Hegglin异常以及低(无)纤维蛋白原血症;尿毒症、肝硬化、维生素B12缺乏症、血小板抑制药等。　(2) 血小板聚集率增高：高凝状态和血栓性疾病，如急性心肌梗死、心绞痛、糖尿病、脑血管疾病、深静脉血栓形成、先天性紫癜性心脏病、高β脂蛋白血症、抗原-抗体复合物反应、人工瓣膜、口服避孕药、吸烟等。

（1）样品提取同前列腺素测定法。

（2）取8mm×75mm玻璃管，总计数管（T）加PBS300μl，非特异结合管（NSB）加PBS200μl，零标准管（S0）加PBS100μl，标准曲线管（S1～7）加不同浓度标准工作液100μl，测定管加经纯化样品液100μl。

（3）向S0、S1～7和测定管加稀释抗血清100μl，放4℃6～12h。

（4）向所有管各加[3H]-TXB2工作液100μl，放4℃6～12h。

（5）除T管外，各加活性炭分离剂100μl，混匀后放4℃15min，离心3500r/min（4℃）15min。

（6）将上清液全部倾出至预先加有11ml闪烁液的计数瓶中，充分混合，放置12h后在液体闪烁计数器上测量放射性。

（7）在半对数坐标纸上以LogitB/B0为纵坐标，各标准管TXB2（pg）为横坐标，按直线回归法绘制标准曲线，然后依样品管的LogitB/B0值从标准曲线上求出样品管浓度，如液体闪烁计数器带有数据处理系统，可直接给出标准曲线，有关参数及样品管浓度。

　　2′A：2min幅度；4′A：4min幅度；MA：最大幅度；TMA：达到最大幅度的时间；T50%：达到1/2最大幅度的时间，Dt（延滞时间）：指第一波末到第二波起始的时间；S（斜率）：第一波上升弧度切线与水平基线的夹角。

　　（1）采血：采血要顺利，避免反复穿刺而将组织液抽到注射器内，或混入气泡。

　　（2）时间：实验应在采血后3～4h内完成，时间过长会降低血小板的聚集强度和速度。

　　（3）温度：采血后的标本应放在15～25℃室温下为宜，低温会致使血小板激活。

　　（4）血浆pH值：血浆pH值6.8～8.5可获得最佳聚集效果，pH值小于6.4或大于10.0，聚集受到抑制或消失。

　　（5）抗凝剂：聚集作用随血浆枸橼酸枸橼酸钠浓度的降低而增高，故贫血时应加入较正常者为多的抗凝剂。乙二胺四乙酸和肝素不宜作抗凝剂。

　　（6）药物：阿司匹林、双嘧达莫、肝素和口服抗凝剂均可抑制血小板聚集，阿司匹林作用可持续1w。

　　（7）PRP中混有其他物质：混有红细胞、溶血、血脂过高等因素可降低透光度，掩盖血小板聚集变化。

　　（8）接触表面：用未涂硅的普通试管或吸管，可影响血小板聚集，甚至使原来正常者出现异常结果。

　　（9）诱导剂：ADP配制成溶液后宜在－20℃冰箱贮藏，一般半年内不会降低活性；应用肾上腺素时应避光。