血管性血友病因子抗原

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血管性血友病因子抗原测定主要用于血管性血友病的诊断和鉴别诊断。升高见于剧烈运动、怀孕中后期、心肌梗死、心绞痛、脑血管病变、肾脏疾病、肝脏疾病、糖尿病、妊娠高血压综合征、大手术后及周围血管病变等。减少见于血管性血友病，是诊断和分型的重要依据。

1）取一定量VWF∶Ag抗血清，用三羟甲基氨基甲烷-巴比妥缓冲液稀释10倍，另取5g/L琼脂糖三羟甲基氨基甲烷-巴比妥缓冲液隔水融化，冷却至56℃。然后将预温至56℃的稀释VWF∶Ag抗血清1∶60混合（视抗体效价而定），制成8cm×8cm、厚1.5mm的琼脂板，距玻板一边约2cm处打一排小孔，径孔3mm，孔间距为5mm。　　

（2）将琼脂板置于电泳槽内，孔朝阴极，用滤纸作盐桥，用定量注射器吸取原血浆1∶2、1∶4、1∶8、1∶16等不同倍数稀释的健康人血浆各10μl，分别加入抗体琼脂板小孔里。待检血浆样品用Tris-巴比妥缓冲稀释1倍后，加入各样品孔内。每孔加量均为10μl。　　

（3）电泳条件：电泳110～150V，电流约5mA/块板，时间18h，温度低于15℃。　　

（4）电泳完毕，取出凝胶板浸于4.4mmol/L磷钼酸染色液中20min以上，然后再放入生理盐水中浸泡10min，即可见明显火箭状沉淀峰，也可用氨基黑按常规方法染色。　　

（5）染色后，用双分规测量火箭电泳峰的高度（从加样孔上缘到峰顶），将标准血浆5个读数，通过回归方程得出标准曲线，然后求出各测定样品VWF∶Ag的含量，再乘以稀释倍数（×2），即样品实际浓度。表示相当于正常血浆的百分率。

　　1.抽血前一天不吃过于油腻、高蛋白食 物，避免大量饮酒。血液中的酒精成分会直接影响检验结果。

　　2.体检前一天的晚八时以后，应禁食，以免影响第二天空腹血糖等指标的检测。

　　3.抽血时应放松心情，避免因恐惧造成血管的收缩、增加采血的困难。