痰液分泌型IgE

咳嗽干咳

痰液中分泌型IgE检查对呼吸道疾病的诊断有辅助意义。支气管哮喘及过敏性肺炎患者，其痰中SIgE含量可增高。

ELISA为多反应、多试剂、多步骤的检验方法，必须严格按照要求细心谨慎操作，否则得不到准确的结果。用于检测不同项目的ELISA操作虽略有差别，但均包括加样、保温、洗涤、比色等步骤，以下叙述各步骤的操作要点。　　

(1)试剂准备：按试剂盒说明书要求，稀释或配制试验中需要的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜和高质量的。自配的缓冲液应该用pH计测量。从冰箱取出的试验用试剂温度应达到室温后使用。在用HRP作为标记物的试验中，不可用被金属污染的容器。　　

(2)加样：按要求准备包被好的ELISA板。血清(划体液)标本应该是新鲜采集的或在冰箱中妥善保存的，高度溶血或混浊的标本不宜使用。含叠氮钠作为防腐剂的标本不可用于HRP标记的一步法ELISA。加样时应将标本加在孔底，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可出现气泡。定量测定中加样量的准确度应达到定量要求。在定性测定中有时不强调加样量的准确性，例如规定为加样一滴。此时应该使用相同口径的滴管，并保持正确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。加酶结合物和加底物的操作和要求与加标本相同。

　　1.ELISA中的主要试剂成份如抗原、抗体、酶结合物、底物等，如制备不当或保存不妥，均易变质失活。ELISA的步骤多，操作如不合规范，难于得到准确的结果。因此为保证检测的有效性，每次试验必须进行质量控制。优良的试剂盒中提供的阳性对照和阴性对照一般可作为试验的质控品，按其说明操作，从所得的吸光度值可以判断试验的有效性。以临床检验中最常用的HBsAg检测为例，试剂盒中的阴性对照应为HBsAg阴性的人血清，阳性对照应标明HBsAg含量(例如9±2ng/ml)。每批试验应同时作3份阴性对照和二份阳性对照。阴性对照测定所得吸光度值应小于某一数值(例如0.100)，而阳性对照吸光度均值减去阴性对照吸光度均值应大于某一数值(例如0.200)。这些数值为该试剂盒在规定的测定条件下，特定的实验值。因此如测定结果符合要求，既表明所用试剂的有效性，又表明操作的正确性，只有在这种情况下，该批试验方为有效。

　　2.有的试剂盒中所含阳性对照和阴性对照不符合作为质控品的要求，或实验室的测定条件如比色计等，与试剂盒说明中的不同，则应根据实际情况采用合适的质控品和从实验得出的本实验室的质控值。商品的质控血清价格昂贵。定性测定ELISA的质控品一般可自行制备。仍以HBsAg检测为例。阴性对照可取自用高质量试剂检测为HBsAg阴性的献血员。阳性对照的制备可在阴性对照血清中加入适量的HBsAg阳性血清，将此混合血清与参照标准品或定量质控品作对比测定，标定其HBsAg含量。然后进行适当的稀释，得到所需浓度的HBsAg阳性血清，再加入适量抗菌防腐剂如庆大霉霉素和柳硫汞后，分装低温冻存。