生殖器疱疹

　生殖器疱疹病因

　(一)发病原因

　　病原体：是单纯疱疹病毒(herpes simplex virus，HSV)。HSV是疱疹病毒的一种，为较大的DNA病毒，其直径为150～200nm。中心球状区为双股DNA构成的核心，外面被覆由162个壳微粒排列成的立体对称的20面体，周围有含类脂质的包膜。

　　HSV主要经过皮肤、粘膜或破损处进入人体内，首先在表皮或真皮细胞内复制。不论有无临床症状，病毒在局部充分复制后感染感觉神经或自主神经未稍。病毒沿神经轴索进入神经节内的神经细胞中。动物实验发现，从皮肤粘膜接种HSV到神经节内的神经细胞发现病毒，大约2天时间，可见其感染速度相当快。

　　HSV-1通常由呼吸道、消化道及皮肤粘膜密切接触感染。所以HSV-1常潜伏在三叉神经根和颈上神经节内。故临床所见主要是颜面部位的疱疹，HSV-2主要因性行为传播，生殖器接触而感染，所以HSV-2则常潜伏在骶神经节内，故临床主要表现为生殖器疱疹。患者血清学均为阳性，可终生有泌尿生殖道HSV间歇性活动。

　　感染最初阶段，病毒先在神经节及与之相接触的神经组织内复制，然后通过感觉神经到达其未稍而使与之相关的皮肤、粘膜表面发生皮损。病毒从外周感觉神经扩散到皮肤、粘膜，这一情况，可以解释表皮大面积受感染和远离原发部位新病损发生的原因。原发性HSV感染病人常有这些特点，而且从远离接种部位的神经组织中发现病毒。初次发病临床症状消退后，在神经内不再分离到感染性病毒。在细胞表面也检不出病毒蛋白。各种刺激因素，如免疫抑制、劳累、感染、精神创伤以及皮肤神经节创伤等都可引起病毒复活。

　　原发感染缓解后，神经节中找不到感染的病毒和病毒结构蛋白，潜伏感染神经细胞中的病毒基因组和显性感染不同，前者HSV的DNA是环状的，在潜伏感染的小鼠神经细胞核内和人的三叉神经节中检出的RNA转录物中可与编码早期基因ICPO的区域杂交，此RNA是编码ICPO的DNA互补链转录来的。此“反义”RNA可能参与维持神经内潜伏感染但不参与建立潜伏感染，维持潜伏感染的机制不清楚，似乎潜伏感染的细胞仅有HSV蛋白质的部分转录。

　　HSV可分为两种抗原型，即HSV-1和HSV-2型。HSV-l型感染99%以上发生于口、咽、鼻、眼及皮肤等部位，而HSV-2型感染则常见于GH。据统计，GH病原体的90%为HSV-2，10%为HSV-1。两者在许多方面不同，其相异点见表1。

　　HSV耐冷怕热，在50～52℃水中可迅速灭活，4℃时可存活数周，-70℃时可存活数月之久。但在干燥环境中，温度虽高也可使其存活时间延长。HSV对常用的消毒剂敏感，0.5%甲醛溶液、l%来苏水溶液或肥皂水等均可使其灭活。

　　(二)发病机制

　　HSV存在于GH病人和病毒携带者的皮肤、黏膜的分泌物、唾液和粪便中。它经呼吸道、口腔、生殖器的黏膜和破损的皮肤处侵入人体，在入口处生长繁殖，后经血液或神经通路播散，引起原发性单纯疱疹的损害。若发生于口、鼻及眼周围者，即为口唇疱疹，而发生于生殖器部位者，即为GH。部分呈无症状的隐性感染状态。

　　当原发性单纯疱疹的病变消退以后，HSV并未消除，而是潜伏于人体的黏膜、血液和感觉神经节内，在GH，HSV常潜伏于骶神经节内，并经唾液、血液和黏膜分泌物排毒。由于神经细胞缺乏病毒繁殖所需的特异性转录酶，因而HSV在神经细胞内保持静止状态。一旦机体抵抗力降低，在某些诱因如发热、受凉、日晒、情绪激动、消化不良、月经、机械刺激或放射线照射等因素的作用下，使潜伏状态的HSV激活，从后根神经节中释放出来而引起复发性单纯疱疹。

　　在原发性感染后4～5天，体内可产生针对HSV的中和抗体和补体结合抗体，使复发性单纯疱疹的病情减轻，并不发生病毒血症，但不能制止其复发。单纯疱疹的复发与细胞免疫功能降低有密切关系。

　生殖器疱疹鉴别

　主要与硬下疳，软下疳鉴别：硬下疳为单个质硬的溃疡，无疼痛感，无复发史，实验检查USR(+)或RPR( + )，梅毒螺旋体可见。软下疳为质软的溃疡，局部虽有疼痛感但无复发史，实验检查链杆菌阳性。

　　1、固定型药疹

有药物过敏史，发疹前有用药史，每次发病位固定且不限于外阴部，其他的皮肤、黏膜交界处也有损害，皮损主要为暗红斑上有厚壁水疱或大疱。

　　2.Behcet综合征

可首先出现口腔或外生殖器溃疡，针刺试验阳性，以后可伴虹膜睫状体炎及四肢结节性红斑。

　　3.梅毒硬下疳

潜伏期2～4周，局部硬结、溃疡，无自觉症状，苍白螺旋体和梅毒血清反应阳性。

　　4.软下疳

发病前2～5天有性乱史，损害为外阴部溃疡，基底软，伴疼痛与触痛，单侧腹股沟淋巴结肿大、触痛，可形成溃疡并排脓，可检出Ducrey嗜血杆菌。

　　其他生殖器部位皮肤病如接触性带状疱疹、白塞病。脓疱病有时与生殖器疱疹相似，可以从病史及检查方面相区别。

　　一、症状

　　HSV感染是一种全身性疾病，病毒经呼吸道、口腔、生殖器粘膜或破损皮肤进入人体，可潜于人体正常粘膜、血液、唾液以及局部感觉神经节和多数器官内，几乎所有的内脏和粘膜表皮内都可分离到HSV。

　　原发感染多为隐性，大多无临床症状或呈亚临床表现，仅有少数(约1-10%)可以出现临床症状。主要见于免疫功能低下婴幼儿或严重营养不良或有其它感染的儿童，成人罕见。原发感染消退后，病毒可持续潜居体内。正常人中约有半数以上为本病毒的携带者，可通过口、鼻分泌物而成为传染源，由于HSV在人体中不产生永久免疫力，故每当机体抗病能力减退时，如患某种发热性传染病，胃肠功能紊乱、月经、妊娠、病灶感染、过度疲劳、情绪环境改变时，体内潜伏的HSV即被激发而发病。

　　HSV-1主要引起口唇疱疹，咽炎，角膜结膜炎和散发性脑炎，而HSV-2感染主要引起生殖器疱疹，但在临床上也有相反情况。

　　HSV感染的潜伏期为1-45天，平均为6天，HSV-1感染主要发生于口角、唇缘、鼻孔等皮肤粘膜交界处，亦可见颜面或口唇，开始局部先有灼痒及轻度紧张感，偶有伴发神经痛。随即出现红斑，在红斑基础上发生簇集性小丘疹，迅速变为粟粒至绿豆大小的水疱，内容澄清，水疱破裂后出现糜烂面，数日后干燥结痂。自觉灼痒，偶有倦怠，不适和轻微发热等全身症状，愈合可遗留暂时性色素沉着。全病程1-2周左右。

　　HSV-2感染主要发生于生殖器部位，患部先有烧灼感，很快在红斑的基础上发生成群的小水疱，多见男性包皮、龟头、冠状沟、阴茎等处，偶见于尿道;女性常见于阴唇、阴蒂、阴道、宫颈等处。水疱可逐渐变成脓疱，约6天左右破溃而形成糜烂或浅的溃疡，自觉疼痛。病人可发生尿道炎，出现排尿困难。多数人有腹股沟淋巴结肿大疼痛，有的病人可出现发热、肌肉痛及脑膜炎症状。如发于女性宫颈者可形成溃疡坏死，阴道分泌物增多，可有下腹痛。应注意有无宫颈癌发生。孕期患生殖器疱疹时易致流产、早产或死胎，并易使新生儿感染，发生新生儿单纯疱疹。本病一般经过3周左右可以痊愈，但常有反复发作，一般原发疹后1-4个月内复发，症状较原发者轻，范围亦小，局限于生殖器部位，有时仅有1-2个疱疹，病程亦短，自发病至愈合8-12天。本病也可伴有生殖器以外部位的感染，如口唇、臂部及中枢神经系统等。

　　二、体征

　　皮损为红斑基础上可见成群的水疱或脓疱或成糜烂及溃疡。女性患者约90%伴有HSV宫颈炎，宫颈可见发红、糜烂、溃疡，有脓性阴道分泌物。有的患者可有腹股沟淋巴结肿大压痛或体温升高。皮肤病变也可出现在口唇 、手指、臀部、大腿、手臂，甚至眼部与咽喉。并发脑膜炎或横贯性脊髓炎，一般于发疹后3-12天出现颈项强直等颅内压增高的现象。

　　三、潜伏感染和复发

　　HSV感染人体后1周左右，血中出现中和抗体，3-4周达高峰，可持续多年，这些抗体能清除病毒和使机体康复，但大多数个体不能彻底消灭病毒，也不能阻止复发，病毒以潜伏状态长期存在宿主体内。不同亚型HSV感染者急性首发生殖器疱疹的临床过程相似，但生殖器病变复发率不同，首发HSV-2感染者约90%，在12个月内会出现一次复发(平均复发4次)，而初次感染HSV-1者仅50%出现类似复发(平均复发次数小于1)。不同个体及同一病人一生中生殖器HSV-2感染的复发率变化很大，大多数年复发5-9次，一般在原发疱疹消退后1-4个月内发生，有些患者受到促发因素，如发热、月经、日晒、寒冷、某些病毒感染等的影响而复发，其特点是每次复发往往发生在同一部位，复发前可有前驱症状如局部瘙痒，发疹前数小时感染部位有灼烧，麻刺感。

　　复发生殖器疱疹(GH)对患者心理影响较大，由于目前尚无预防复发的有效疗法及可能有诱发生殖器恶变的危险性，故给患者带来心理影响，患者多有抑郁、恐惧等心理障碍，这又直接影响HSV的复发。我们的治疗经验，只要患者坚持规律治疗，都能治愈。

　　四、HSV与HIV感染：

　　HSV常与HIV-1同时感染，并能促进病情发展，引起严重的局部和播散性感染。目前认为HSV是一种调节因素，能激活HIV复制，Heng对6例AIDS合并生殖系统HSV皮肤损害患者进行皮肤活检，发现角化细胞和巨噬细胞均有HIV-1和HSV-1杂交后使HIV-1保留其感染性，而无需与CD4分子结合即能进入细胞内。此外HSV-1能刺激潜伏型HIV-1，而增加HIV-1/HSV-1共同感染和在组织中的复制。

　　表皮细胞发生气球样变性，其中可见有嗜酸性包涵体。表皮开始为网状变性形成的多房性水疱，以后聚合为单房性水疱。真皮乳头层有轻度水肿，有轻重不等炎性细胞浸润。反应严重时可有严重血管炎表现。

　　HSV感染的诊断要依据病史、临床表现和实验室检查结果而定。有不洁性交史，而且在生殖器部位出现皮肤红斑和原发性水疱，易复发等不难诊断。必要时可作疱液涂片，培养、接种、免疫荧光检查。血清免疫抗体测定等，均有助于诊断和确定病毒类型。

　　一】细胞学方法

　　对皮损刮片做Wright-Gemsa (Tzanck试验)或Papanicolaou染色，可检出HSV感染特征的巨细胞包函体，但不能区别HSV感染或水痘 — 带状疱疹病毒感染，敏感性仅为病毒分离的60%。

　　二】培养法

　　从水疱底部取材做组织培养分离病毒，为目前较敏感、最特异的检查方法，需5-10天，因其技术条件要求高，价格昂贵，不能普遍使用。

　　三】抗体检测

　　目前最广泛的是HSV-2抗体检测，如蛋白印迹法也可用gD2作抗原检测HSV-2抗体，具有敏感性，且能区分HSV-1和HSV-2的优点。

　　四】基因诊断

　　(一)用PCR分型检测单纯疱疹病毒

　　PCR是一种敏感性高，特异性强的快速检测方法，标本中含有1fg HSV-DNA就可以检出，其在HSV感染的诊断研究中发展较快，且分型检测HSV是发展的趋势。

　　1、标本采集和处理

　　(1)标本采集

　　①脑脊液：直接无菌采取患者0.5ml脑脊液标本于无菌试管送检.如肉眼可见血色，应离心取上清。

　　②羊水及婴儿血清： 同上，应避免溶血.

　　③脑组织： 脑组织尸检、活检标本， 加1ml PBS标本缓冲液研磨后，待检。

　　④眼及皮肤病灶分泌物：用预测(半干)棉拭子直接取患处分泌物， 置1ml PBS标本缓冲液中送检。

　　⑤生殖器(宫颈、阴道、外阴、阴茎)标本：先用消毒棉拭子擦去病变部位表面粘液、污垢，再用预潮棉拭子用力擦拭患处分泌物，置1ml PBS标本缓冲液中送检。

　　(2)标本处理

　　①预处理：所有液体标本均可直接进行模板制备;可以取100μl标本液，离心5000 r/ min x 5min后，去上清，取沉淀物进行模板制备。

　　②模板制备：a： 蛋白酶K消化裂解法：沉淀物加100μl蛋白酶K消化裂解液，55℃1 h后，煮沸10 min，离心5000 r/ min x 5min，收集上清。 b： 水煮法：沉淀物加100μl蒸馏水，摇均水煮20 min，离心5000 r/ min x 5min收集上清。c： 1%Triton X-100裂解法：取采集的标本液100μl，加入1μl Triton X-100，水煮20 min，5000 r/ min x 5min，收集上清。d： 5%NP-40裂解法：取采集的标本液100μl，加5μl NP-40，水煮20 min ，5000 r/ min x 5min收集上清。e： 如标本溶血严重经上述裂解处理后，再加等体积酚-氯仿抽提、冷乙醇沉淀DNA，加10μl DW溶解待检。

　　2、PCR扩增

　　(1)引物设计。以HSV DNA聚合酶的高保守区为检测靶序列以确保特异性。设计3个引物，一个上游共同性引物，DNAP5(5′ATGGTGAAAACATCGACATGTACGG3′)：二个下游特异性引物，DNAP3-1(5′CCTCGCGTTCGTCCTCGTCCTCC3′　)和DNAP3-2(5′CCTCCTTGTCGAGGCCCCGAAAC3′)，可以分别扩增出HSV-1 469bp DNA片段(1981～2359)、HSV-2 391bp片段(1561～1953)：从二型PCR扩增产物中设计了一个不分型的特异性探针HSVP3 5 ‘GGCGTAGTAGGCGGGGATGTCGCG 3‘)。

　　(2)PCR实验体系。取模板10μl： DNAP5 0.5(0.2μmol/L)：DNAP3-1 0.5μl (0.2μmol/L)：DNAP3-2 0.5μl (0.2μmol/L)：4 x dNTP 8μl(4 x 200μmol/L)：10 x dNTP 8μl(4 x 200μmol/L);10 x 缓冲液10μl：DMSO 4μl;加DW 65.5μl; 石蜡油 30μl.。

　　水煮(96℃～100℃)7min

　　加TaqDNA聚合酶1μl;(2.5U)

　　72℃4 min

　　↓

　　95℃40s

　　↓

　　65℃60s → 72℃70s

　　↓　　33个循环

　　70℃4 min

　　3.扩增产物的检测和分析

　　(1)琼脂糖凝胶电泳染色法：取扩增产物20μl加样品缓冲液4μl混匀后，点样于2%琼脂糖凝胶板，70V电泳15～20min，溴化乙锭(EB)染色5min，于紫外灯下观察结果在溴酚蓝后面有一条或二条亮红带为阳性结果，HSV-2带在前，HSV-1带在后，无带则为阴性结果。

　　(2))XhoI酶谱法：取HSV-1型PCR产物50μl加XhoI50U，37℃1h后，置3%琼脂糖凝胶中，70V电泳15～20min，可产生46bp片段带(引物后面);与正常PCR产物比较，XhoI酶切后的大片段电泳位置前移。

　　(3)Southern印迹法：PCR产物20μl经电泳分离后，用变性液处理60min，再用中和液处理90 min，转移至硝酸纤维素膜上：80℃烤膜2 h，42℃预杂交(杂交液中)30 min， 加入32p标记HSVP3探针后，42℃杂交过夜;次日用1%SDS/ PBS pH7.2， 42℃洗15min， 0.5% SDS/PBS pH7.2， 42℃洗15min; 膜置X线暗盒内放射性自显影12～15h， 显影为阳性， 不显影为阴性。

　　(二)套式PCR

　　套式PCR(nested primers-polymerase chain reaction，NP-PCR)是通过“外侧”、“内侧”两对引物，即一对扩增较大DNA片段的“外侧”引物和一对位于扩增产物中再扩增小片段的“内侧”引物，这样两次连续放大可以提高PCR检测的灵敏度，保证产物的特异性。但该方法不能分型，能100%检出HSV-1，50%检出HSV-2，应改进分型检测HSV，更好地在临床应用和基础研究中推广应用。

　　1、标本处理：

　　(1)标本采集同上

　　(2)DNA 制备：①脑脊液：取100μlCSF 水煮15min，加入250μl无水乙醇，放-30℃10 min;离心10000g30 min，去上清，30℃干燥后，加入10μl DW; ②脑组织细胞：取沉淀物加100μl蛋白酶K消化裂解液，56℃作用1h，水煮10 min;取上清加入等体积酚一氯仿(V/V)，轻摇10 min，离心10000r/ min*10 min;取水相，加入250μl DW溶解。

　　2、PCR扩增

　　(1)引物设计：选择HSV1糖蛋白D基因为检测靶基因。

　　NP-PCR 的引物和探针序列

　　“外”引物

　　BJHSV1.1ATCACGGTAGCCCGGCCGTGTGACA19-43

　　BJHGV1.2CATACCGGAACGCACCACACAA218-239

　　“内引物”

　　BJHSV1.3CCATACCGACCACACCGACGA51-79

　　BJHSV1.4CGTAGTTGGTCGTTCGCGCTGAA166-188

　　探针

　　BJHSV-1PROTACGAGGAGGAGCTGTATAACAAAGTCTGT96-125

　　(2) PCR实验体系和程序： 反应体积为50μl;模板10μl;BJHSV1.1 0.5μl(0.2pmol/L); BJHSV1.2 0.5μl(0.2pmol/L); 10 x 缓冲液5μl; 4 x dNTP 4μl(4 x 200mmol/L);DW 27μl; 石蜡油30μl。循环参数为95℃30s; 55℃30s; 72℃60s; 循环20次， 取其扩增产物1μl加入含有BJHSV1.3和BJHSV1.4反应体系中进行套式扩增， 先95℃变性2min，循环参数为95℃30s; 55℃30s; 72℃60s; 循环30次后，72℃延伸5 min;。

　　(3) 扩增产物分析：

　　① 琼脂糖凝胶电泳染色法：

　　取扩增产物10μl点样于2%琼脂糖凝胶中， 70V电泳15-20min，溴化乙锭染色5min，于紫外灯下观察结果，在溴酚兰后面有一条，或二条亮红条带为阳性结果， HSV-2带在前，HSV-1带在后，无带则为阴性结果。

　　② Southern印迹法：

　　PCR产物20μl 经电泳分离后，用变性液处理60min，再用中和液处理90min，转移至硝酸纤维素膜上，80℃烤膜2h，42℃预杂交(杂交液中)30min，加入32P标记HSV探针后，42℃杂交过夜，次日用1%SDS/PBS pH7。2，42℃洗15min，0.5%SDS/PBS pH7.2，42℃洗15min;膜置X线暗盒内，放射性自显影12-15h，，显影为阳性，不显影为阴性。

　　(三)、聚合酶链反应—酶谱法

(polymerase chain reaction-endonuclease cleavage PCR-EC)

　　具有经济广泛等特点;不仅能一次性分型检测HSV-1，HSV-2，EBV，CMV四种病毒，而且方法本身快速、方便、无放射线损伤，易被实验室接受。可检出3个CFU的HSV1，灵敏度高，能检测出中枢神经系统感染第1dCSF中HSV DNA阳性结果，并可用于药物治疗效果的评价。由于病毒的变异性，会出现酶切点突变丢失现象，从而造成酶切阴性结果。对此可以通过型特异性探针或序列分析解决。

　　1. 标本处理

　　(1)标本采集，方法同上。

　　(2)DNA模板制备：每份标本取200μl，按200μg/ml加入蛋白酶k，56℃作用1h;

　　加入等体积的酚—氯仿(v/v)轻摇10min，离心1000r/min x 5min;取水相加入500μl(2.5倍体积)无水乙醇，-20℃过夜沉淀DNA，离心15000r/min x 5min，吸去液体，30℃干燥后，加蒸馏水25μl溶解， 待检。

　　2. 引物设计：

　　P1，5′CGACTTTGCCAGCCTGTACC3′

　　P2，5′AGTCCGTGTCCCCGTAGATG3′

　　(1)PCR实验体系：

　　反应体积100μl; 模板10μl ; P1 0.5μl(10pmol/L) ，P2 0.5μl(10pmol/L); 4 x dNTP 4μl(4 x 200mmol/L); 10 x 缓冲液10μl， DMSD 5μl， DW 65μl， 循环参数为94℃60s; 60℃60s; 72℃60s;循环40次72℃延伸4min。

　　(2)扩增产物检测与酶切分型.

　　①第一步电泳鉴定： 取10μlPCR产物加4μl样品缓冲液，加入2%琼脂糖凝胶板，70V电泳(5-20min)加EB染色5min后，紫外灯下观察，可初步鉴定扩增产物大小。

　　②酶切分析：分别取20μlPCR产物于2个Eppendorf管中，加入50μl无水乙醇，-20℃沉淀DNA，再分别用20μlSmal和BamHI反应缓冲液溶解，加入SmaI或BamHI 50U于相应Eppendorf 管内，37℃作用1h。

　　③第二步电泳分型，取10μlPCR酶切物加4μl样品缓冲液，加到2%琼脂糖凝胶中，70V电泳，15-20min后， EB染色5min，与同步加入未酶切的PCR产物相对照。 紫外灯下观察， 结果如下：

　　PCR-EC法检测四种病毒结果

　　病毒型号靶片段SmaIBamHI

　　HSV1518bp476bp 42bp

　　HSV2518bp—225 293bp

　　EBV524bp100bp 424bp277bp 247bp

　　CMV589bp不需酶切，第一步电泳就可以区分

　　(四)用RT-PCR检测单纯疱疹病毒

　　RNA的聚合酶链反应(RNA-PCR)，可能通过检测HSV不同期的RNA，这不仅可诊断HSV感染，而且有利于HSV的潜伏期感染机制的深入研究。

　　RT-PCR是以RNA为模板经逆转录反应(RT)产生cDNA，再以cDNA为模板进行PCR扩增以达到检测目的。因此，RNA-PCR也可称为RT-PCR。

　　1、标本处理：

　　组织块细胞总RNA提取，取100mg组织标本，加1ml硫氰酸胍变性液，于匀浆器中，室温研磨均匀后，移入2.5mlEppendorf 管中。依次加入0.1ml3mol/L(pH4.0)NaAc， 1ml水饱和酚和0.2ml氯仿一异戊醇混匀， 用力振摇10s， 置冰浴15min。10000g4℃，离心20min，取上清水相(上层DNA、下层DNA和变性蛋白质)加入等体积异丙醇置-20℃1h， 沉淀RNA。离心 15000r/min x 10min，弃上清， RNA重新用0.3ml硫氰酸胍变性液溶解， 再加0.3ml异丙醇沉淀， -20℃1h， 沉淀RNA. 离心15000r/min x 10min， 去上清， 沉淀RNA用75%冷乙醇洗一次， 真空干燥。.加10μl TE缓冲液(pH7.4)溶解，低温保存备用.临用前冰浴溶解。

　　2、PCR扩增：

　　(1)引物设计： 选择HSV-1ICPO基因(极早期)为检测靶基因.设计2个引物，

　　P1 5′GGATCCTCACGTGGTTACCCGCGGTCT 3′

　　P2 5′AAGCTTCCGGGGCCGTCCCCGCGGGCG 3′可以扩增ICPO 中266bp序列。

　　1个探针：5′CCGGCTGGAGCCGCCGCACCCTGCT3′。

　　(2)PCR实验体系： 总反应体积为50μl，模板10μl (0.25-1.0μg)P1 1μl (20pmol/L);P2 1μl (20pmol/L); 4 x dNTP 4μl(200μmol/L); 10 x 缓冲液5μl; AMV(逆转录酶) 2μl (50U); DW 26μl; 循环参数， 94℃变性2min后 94℃50s，60℃60， 72℃60s，循环40次后72℃延伸5min。

　　3、扩增产物的鉴定：

　　(1)琼脂糖凝胶电泳染色法：取10μl PCR扩增产物加4μl 样品缓冲液，混匀后加样2%琼脂糖凝胶板，70V电泳15-20min，EB染色5min。紫外灯下观察扩增条带。

　　(2)Southern印迹杂交法：用32P标记的特异性探针检测PCR产物，方法同上。

　　总之，在HSV感染性疾病的临床诊断中，PCR能对前病毒或潜伏期低复制的HSV特异性靶DNA片段进行扩增检测，远较DNA探针敏感，并能在血清中抗体出现前就可以检出。因此，PCR无论是作为基础研究手段，还是作为临床检验诊断方法，均具有广阔的前景。

　　五】病理组织学诊断

　　细胞内水肿，基底层形成大水疱，病灶周围有多核巨细胞浸润，特别是多核白细胞与淋巴细胞充斥于病灶中间。

　　1.原发性GH

　　(1)潜伏期：

为2～7天，常为3～5天。

　　(2)好发部位：

男性多发生于龟头、冠状沟、尿道口、阴茎体及阴囊。女性好发于外阴、阴道及宫颈。两性均可见于肛周、大腿及臀部。

　　(3)皮损形态及演变：

患处先有烧灼感，随即出现多个群集的红色斑丘疹，并迅速变成小水疱。疱液起初清亮，以后渐变为脓性。水疱易破溃，形成糜烂或浅溃疡，伴明显疼痛。之后结痂而愈，病程约2～4周。

　　(4)全身症状：

发病前或发病时可有全身症状，如发热、头痛、全身不适、颈项强直和骶2～4段感觉异常，或有排尿困难和白带增多。几乎所有患者均可伴腹股沟淋巴结肿大及压痛。

　　2.复发性GH

　　约在原发性GH痊愈后1～4个月发生。首次HSV-2感染后1年内近60%的患者复发，第1年内可复发4～6次，以后复发次数减少。eves等发现在生殖器感染者中，HSV-1感染者复发率为14%，而HSV-2感染者则有60%复发。

　　复发性GH患者可有上述激发因素，或有前驱症状，全身症状较轻，复发部位多在原处，病程也较短，皮损约经10天左右即消退。由于病损反复发作，难以控制，患者易出现精神负担和性功能障碍，甚至发生抑郁症等。但其损害与原发性者甚为相似。

　　3.特殊型GH

　　(1)男性同性恋者GH：

本病仅次于淋球菌引起的肛门直肠炎。有人从62例有肛门直肠症状但淋球菌检查阴性的男性同性恋者中，29%检出了HSV-2。临床表现多为严重的肛门、直肠疼痛，其他症状为便秘、肛门内有分泌物、里急后重和发热等。部分病人肛周有水疱或溃疡。

　　(2)孕妇和新生儿GH：

孕妇患GH后，其后果严重。对妊娠GH患者HSV-2携带者来说，最重要的是传染给新生儿。当产道内存在HSV-2时，可有40%～60%的新生儿遭受感染，感染严重者可致死亡。

　　在妊娠早期，患GH的孕妇可影响胎儿，导致流产或死胎。新生儿的先天性感染，出生时可出现带状分布的疱疹、癫痫发作、出血倾向与肝脾肿大。如通过产道感染或胎膜早破而发生逆行感染时，轻者出生后数日至数周可无临床症状，早期可仅有吃奶较差、兴奋，以后可发生病毒血症或疱疹性脑炎，重者发生播散性HSV感染，可出现高热、呼吸困难、出血及中枢神经系统病变，预后不良。

　　因此，妊娠足月患GH者，如时间允许，应每周从阴道及子宫颈取材，检查有无病毒感染，若细胞学或病毒培养阳性而羊膜尚完整，或破裂后不足6h，建议剖宫产，以避免胎儿经阴道分娩而发生新生儿HSV感染。

　　HSV-2感染与宫颈癌：有证据表明，生殖器HSV-2感染可能与宫颈癌的发生有关。血清流行病学检查发现，宫颈癌患者血清中抗HSV-2抗体较对照组妇女明显增高。Nahmias等发现，GH患者发生宫颈非典型增生者为对照组的2倍，而发生原位癌者则为对照组的8倍。近年来研究证明，患侵袭性宫颈癌和癌前期病变的妇女宫颈脱落细胞中，HSV-2抗原阳性率明显高于对照组，这种HSV-2抗原位于肿瘤细胞的胞质内，提示为肿瘤细胞表达的病毒抗原。有人发现，宫颈有高度非典型增生、原位癌及鳞状细胞癌者的活检组织中，用间接免疫荧光染色可发现其中的HSV-2抗原。应用DNA-RNA原位杂交技术在宫颈癌和癌前期组织中67%可发现HSV-2特异性mRNA。Frenkel等在宫颈癌组织中检出HSV-2的DNA。还有作者从手术切除后经放射的宫颈癌病变组织中分离出了HSV-2。

　　HSV-2感染与HIV感染 与其他生殖器溃疡性疾病一样，GH增加了HIV感染的危险性。HSV感染是HIV感染的辅助因子。在HIV感染者尤其是HIV感染的同性恋者中，HSV-2感染率更高，且GH的并发症多而严重。在AIDS患者中，耐阿昔洛韦(无环鸟苷)的HSV毒株感染多见。

　　根据病史、症状和皮肤或黏膜表现，一般不难作出诊断。必要时可进行实验室检查，以明确病原体。

　　中医病机和辨证 本病多因体内蕴热，外感毒邪，热毒相结，肝胆二经湿热下注而生;或因肌肤虚弱，邪毒留肤，遇热即发。

　　六】中医辨证分型

　　1.湿热下注型

　　主证：患处水疱、糜烂、痒痛交作，大便秘结，小便短赤。舌红，苔黄腻，脉弦滑数。

　　辨证：湿热下注，外感毒邪。

　　2.肝肾亏损型

　　主证：病情反复发作，兼有心烦寐少，腰酸头昏，食少乏味，口干咽燥。舌质淡，脉沉细。

　　辨证：清热化湿，养肝滋肾。

　生殖器疱疹并发症

　可以引起播散性疱疹、疱疹性脑膜炎、前列腺炎、直肠炎、盆腔炎、脊髓神经根疾病等一系列并发症。在艾滋病流行的地区，该病还可增加艾滋病病毒感染的危险性。

　　部分生殖器疱疹病毒HSV1可能经周围神经沿神经轴转入三叉神经节，HSV2则转入骶神经节长期潜伏于神经细胞内。如机体受到创伤、高热、过敏、月经等原因引起感染和复发时，会并发腰髓部神经炎、脊髓炎，出现臀部及下肢放射性疼痛、膀胱麻痹等症。另外，生殖器疱疹常与其他性传播疾病如淋病、非淋菌性尿道炎、梅毒、尖锐湿疣、阴道念珠菌病、滴虫等混合感染，故在诊治中应该加以重视。

　一、生殖器疱疹检查

　1.细胞学检查

取材后直接涂片，作Wright染色、Giemsa染色或Papanicolaou染色。在多核巨细胞的胞核内找到嗜酸性包涵体时有助于诊断。

　　此法敏感性仅50%～80%，且不具特异性，疾病初期阳性率高，后期阳性率较低。

　　2.病原学检查

　　(1)HSV检查：

用荧光素标记的抗HSV-1和抗HSV-2抗体作直接免疫荧光试验，可区分HSV的型别。

　　(2)HSV抗原检查：

也可用间接免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、蛋白印迹试验或放射免疫试验检测HSV抗原。

　　(3)HSV核酸检查：

包括核酸探针检测法和核酸扩增检测法，后者又分PCR和LCR，敏感性和特异性均强，且快速、简便，对检测材料要求低。

　　(4)HSV培养分离：

常用细胞培养法，主要用于HSV的进一步鉴定。

　　(5)电镜检查：

取水疱液或病变脑组织制片，在电镜下观察病毒颗粒，阳性率为50%，但HSV与其他疱疹病毒在形态上难以区分。免疫电镜检查较为特异。

　　二、培养法

　　从水疱底部取材做组织培养分离病毒，为目前较敏感、最特异的检查方法，需5-10天，因其技术条件要求高，价格昂贵，不能普遍使用。

　　三、抗体检测

　　目前最广泛的是HSV-2抗体检测，如蛋白印迹法也可用gD2作抗原检测HSV-2抗体，具有敏感性，且能区分HSV-1和HSV-2的优点。

　　血清学检查：主要用于检测抗HSV-1和抗HSV-2抗体，诊断HSV的原发性感染，进行HSV感染的血清流行病学调查。可采用免疫荧光试验、酶联免疫吸附试验、免疫印迹试验和放射免疫试验等法检测。在现代，用HSV-2 gD2糖蛋白作抗原检测抗HSV-2抗体，用HSV-1 gDl或gC糖蛋白作抗原检测抗HSV-1抗体，敏感性高，并且可区分抗HSV-1与抗HSV-2抗体。但是，此类检查只能说明患者发生过HSV显性或隐性感染。

生殖器疱疹一般治疗

　　一、生殖器疱疹西医治疗

　　本病有自限性，约1-2周即可自愈。治疗的目的是防止下次复发。本病目前尚无特效药物，治疗原则为缩短病程，防止继发感染，减少复发。

　　1、局部疗法

原则为干燥、收敛、保护患部，防止继发感染。可外涂2%龙胆紫溶液，或选用10%次没食子酸铋(代马妥dermatol)、氧化锌油膏或泥膏、紫草生地榆油膏、0.5%新霉素软膏、或0.25%~0.1%疱疹净(IDU)软膏、5%疱疹净二甲基亚砜溶液(用于皮肤疱疹)等。对颜面部者亦可用10%醋酸铝或锌铜合剂。

　　2.全身治疗

治疗原则其一使感染的HSV不能活化，甚至消灭病毒;其二调节免疫，防止再发，可用阿昔洛韦静滴或口服，丽珠威口服，干扰素肌注，白细胞介素Ⅱ肌注。我们在治疗复发性生殖器疱疹时，使用四医大生物技术中心产的干扰素300万单位肌注，每日一次，10次为一疗程，共三个疗程，适当配合使用白细胞介素Ⅱ或利百多或灵杆菌素，95%的病人不复发。

　　3.病原疗法

　　(1)阿昔洛韦(无环鸟苷)：

可选择性地抑制病毒复制，减少新损害的发生，减轻疼痛，缩短创面愈合及排毒时间。对原发性或初次发作的GH，0.2g，口服，5次/d，连用7～10天;对复发性GH，0.2g，口服，5次/d，连用5天，或0.4g，口服，3次/d，连用5天，或0.8g，口服，2次/d，连用5天。轻症患者1～1.6g/d，分5次口服，连用5～7天;重症病人15mg/(kg·d)，静注，连用5～7天。脱水和肾功能不全者慎用。近年来， 伐昔洛韦(万乃洛韦)、泛昔洛韦(famciclorvir)等阿昔洛韦(ACV)的衍生物也用于本病的治疗。

　　(2)膦甲酸钠：

对有TK基因缺陷的耐ACV病毒感染者，可用膦甲酸钠40mg/kg，静注，每8小时1次，至痊愈。

　　(3)利巴韦林(三氮唑核苷)：

0.6～0.8g/d，口服或肌注，连用5～7天。

　　(4)α、β及γ-干扰素(α、β、γ-IFN)：

100万u/d，共5～7天。

　　(5)聚肌胞

2～4ml，肌注，隔天1次，连用5～7天。

　　(6)阿糖胞苷

(cytarabine)等也可用。

　　4.免疫疗法

Straus等采用gD-2疫苗接种，即重组HSV-2在CHO细胞表达的糖蛋白D，诱导的抗原特异性中和抗体相当于或超过GH患者产生的水平。100微克/次，2个月后重复1次，与对照组相比，复发次数明显减少，对减轻症状和预防感染也有效。

　　5.局部疗法

应注意保护创面，保持清洁、干燥，防止继发细菌感染。5%阿昔洛韦(ACV)软膏或乳剂、α或β干扰素乳剂或凝胶、1%甲紫(龙胆紫)溶液、3%四环素软膏或25%氧化锌油剂等均可使用。

　　6.对症疗法

如继发细菌感染，应酌用抗生素。若疼痛剧烈时可予以止痛剂。

　　7.性伴侣的处理

由于大多数性伴侣可能已经感染HSV，因此他们也应接受检查，必要时予以治疗

生殖器疱疹辨证论治

　　二、中医中药治疗生殖器疱疹

　　中医认为，其病性早期属热证、实证，为湿热、毒火阻滞肝脉;后期则伴有肝肾不足。治疗主要是根据症状、体征，结合舌脉，一般将本病分为三型，即湿热下注、毒热蕴结、肾气不足，分别给予不同的治疗方法。

　　1、属于湿热下注证的生殖器疱疹

常见生殖器部位水疱成簇，周边有红晕，或有糜烂，有轻痒，可见小便黄赤，口苦，口渴，舌红苔黄腻，脉弦滑。这是由于素日喜肥甘厚味，辛辣之品，或嗜烟酒，损伤脾胃，脾失健运，水湿内蕴，郁而化热，湿热之邪下注肝经所致。湿热蕴积于下焦，注于阴部，发为生殖器疱疹。治疗法则宜清热除湿，方药常以龙胆泻肝汤加减：龙胆草10g　山栀10g　黄芩10g　柴胡10g　车前子(包)10g　生地10g　当归10g　木通10g 生甘草10g。方中龙胆草清泻肝经湿热;山栀、黄芩、柴胡配合龙胆草清肝利胆;车前子、木通清热利湿;生地、当归凉血活血;生甘草调和诸药。水疱大、糜烂渗液者，加生苡仁30g，茵陈10g;大便秘结者，加生大黄6g(后下)。现有中成药龙胆泻肝丸，每次6～8克，每日3次，温开水送服。

　　2. 属于毒热蕴结证的生殖器疱疹

见阴部疱疹大而红，局部肿胀，疼痛明显，腹股沟淋巴结肿大，或有低热，排尿困难，舌红绛，脉滑数。这是由于不洁性交，外染淫毒，毒热结聚阴部，蕴结于局部皮肤粘膜所致。治疗法则宜清热解毒，常以方药为清毒神圣汤加减：金银花30g　天花粉30g　蒲公英30g　当归15g　生甘草10g　板蓝根30g。方中金银花清热解毒为主药;天花粉排毒驱腐;蒲公英、板蓝根配合主药加强治疗作用;当归、生甘草养血活血，调和诸药。如小便黄赤，排尿疼痛困难者，加马鞭草15g，天葵子10g，淡竹叶10g;淋巴结肿大疼痛者，加地丁30g，夏枯草10g。

　　3.属于肾气不足证的生殖器疱疹

常见于复发性阴部疱疹，疱疹干涸较小，无自觉症状，但经常复发。这是由于肾气不足，淫毒之邪未尽所致。肾开窍于前后二阴，或由于房劳过度，或由于湿热、淫毒久稽，耗伤肾阴;日久阴损及阳，也可造成肾阳不足。肾阴肾阳是人体最宝贵的物质，统帅着人体全身的阴阳，当肾阴肾阳受损后，人体阴阳就会失调，疾病就容易复发。由于肾气不足故多伴有腰膝酸软，浑身乏力。阴虚者，则多有五心烦热，失眠多梦，遗精早泄，舌红少苔，脉象细数。肾阳不足者，则多有手足不温，少腹拘急，舌淡苔薄，脉象沉细。治疗法则以补肾为主，佐以解毒除湿。常用方药为六味地黄丸加减：生熟地各10g　山药15g　山萸肉10g　枸杞子10g　茯苓15g　泽泻10g　丹皮10g　板蓝根10g 。

　　方中生熟地滋补肾阴;山药、山萸肉、枸杞子滋补肝脾肾三阴;茯苓、泽泻、丹皮乃补中有泻;板蓝根清泻余毒。如阴虚火旺者，加女贞子10g，知母10g;肾阳不足者，加制附片10g ，肉桂10g，仙灵脾10g。

　　阴虚内热，表现：殖器疱疹，反复发作，日久不愈，渗液较少。伴咽干唇燥，五心烦热。舌红绛，苔花剥，脉细数。可用中成药：①知柏地黄丸，每次9克，每日2次，空腹时温开水送服。 ②大补阴丸，每次9克，每日2～3次，淡盐汤或温开水送服。

　　事实证明，常用的一些中药外洗方或外治方，可以减轻生殖器疱疹的疼痛和症状，内治和外治结合起来可提高疗效。以下是常用的中药外洗方和外治方。

　　(1)马齿苋30g，野菊花30g，黄柏30g，煎汤约200mL外洗，每日2次，每次洗敷15分钟。

　　(2)木贼草30g，板蓝根30g，煎汤约200mL外洗，每日2次，每次30分钟 3)芒硝100g兑入沸水300mL，待凉后外洗患部。

　　(4)取鲜半边莲适量，洗净后捣如泥，敷于患处，盖上纱布，每日换药1～2次。

　　(5)取青黛散适量，加入香油调成糊剂，用时涂于患处，每日换药1次。

生殖器疱疹一般护理

　　生殖器疱疹预防保健

　　生殖器疱疹是HSV病毒感染引起的性传播疾病。初次感染生殖器疱疹的患者大部分无临床症状，称为隐性感染。约占被感染者的10%～20%出现症状。一般初次感染恢复后，疱疹病毒潜伏在脊神经节处多数转为潜伏感染状态。 　　复发性生殖器疱疹在原发后1-4个月内发生。第一次Ⅱ型疱疹病毒感染后一年内将近60%患者复发，第一年可复发4-6次。以后次数减少。复发患者全身症状较原发轻，每次发作的病程也较短，通常皮损约10天消退。复发一般都在原处，但水疱数目、持续时间和自觉症状均比原发者轻、很少有全身症状。 因为疱疹病毒2型会潜伏在脊神经节处.病毒目前还没有特效药.因此当身体抵抗力下降时病毒就会在神经节处大量复制繁殖，然后沿神经束到达原先皮损部位再次发病.一般在治疗后六个月以上不复发那么复发的可能性就较小了，除非你再次感染.

　　对生殖器疱疹的护理：

　　首先要预防它的感染， 特别是夏天，气温高，出汗多，加上局部的搔抓，很容易出现局部的感染，每天用清水清洗生殖器部位是必要的。当出现局部的感染后，要及时用消毒水清洗局部。常用3%硼酸水200mL外洗患部，也可用黄连素1片研末加入200mL沸开水中，待凉后清洗患部。 其次，避免局部的搔抓，不可用刺激性太强的药品。患病后需注意预防感冒、着凉、劳累，以减少复发。治疗期间禁房事。

　　复发与以下因素有关：

　　饮酒、吸烟、劳累、受凉、性生活过频、辛辣刺激食品、多食海鲜、包皮过长、性伴侣未同时治疗、导致免疫力低下的其它因素存在等等.所以要综合防治.平时多运动，增强体质，提高自身免疫力.

生殖器疱疹饮食原则

　　一、生殖器疱疹的食疗方

(资料仅供参考，具体请询问医生)

　　(1)薏仁粥(《本草纲目》)

　　组成　薏苡仁60g

　　用法　加水适量，煮粥，加入白糖适量食用，每日1次。

　　适应证　用于阴部疱疹缓解期，具有健脾利湿、清热解毒之效，长期应用可减少复发。

　　(2)苦瓜饮(《福建中草药》)

　　组成　鲜苦瓜适量。

　　用法　绞汁1杯，开水冲服。

　　适应证　本饮具有清热解毒利湿之功，可用于阴部疱疹中医辨证属于毒热夹湿者。

　　二、生殖器疱疹最好吃什么

　　多吃富含维生素、蛋白质的食物有助于疾病的康复，如新鲜的蔬菜、水果及牛奶、鸡蛋等。

　　三、生殖器疱疹不宜吃什么

　　辛辣发物，抽烟饮酒都对康复不利，特别是饮酒可促使本病复发，加重本病的症状，所以，患病后一定不要饮酒。