幽门螺旋杆菌的免疫学检测 检查组合

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对于检测幽门螺旋杆菌感染有重要意义。异常结果：被检血清凝集滴度低于抗原对照4倍两孔或4倍以上为阳性。恢复期血清抗原滴度比急性期高4倍或4倍以上判为阳性。有特殊显色反应，证明有某种蛋白质存在。待检血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1，而且待检血清的OD值≥0.4，则判为阳性。　

1　　一被动血凝测定　2　患者刺取脑脊液，采用稀释抗原固定血清法用96孔V型微量血凝板， 将乙脑抗原作倍比稀释， 使每孔含25uL， 被检血清用稀释液作1：10稀释， 每孔加人25uL产， 再滴加冻干乙脑单克隆抗体致敏羊血红细胞25uL，37℃下放置数小时后观察结果。

3　　二免疫印迹技术　　

(1)蛋白质样品获得：细菌诱导表达后，可通过电泳上样缓冲液直接裂解细胞，真核细胞加匀浆缓冲液，机械或超声波室温匀浆0.5-1min。然后4℃，13，000g离心15min。取上清液作为样品。　　

(2)电泳：制备电泳凝胶，进行SDS-PAGE。

　　不适宜检查人群：无

　　检查前禁忌：注意保护好脑部;准备好各种包装液，并配置好浓度。

　　检查时禁忌：

　　1.患者取脑脊液坐好，以免弄伤头部。

　　2.所用单克隆抗体致敏羊血红细胞要冻干才使用。

　　3.一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定最佳条件。

　　4.显色液必须新鲜配置使用，最后加入H2O2。

　　5.DAB有致癌的潜在可能，操作时要小心仔细。

　　6.严格控制影响标记效率的因素如温度、时间、pH、酶和抗体量等。

　　7.装层析柱时要使柱体均匀、柱面平整，无气泡、裂隙。